活體成像研究底物之：

Firefly D-Luciferin D-蟲熒光素（Luc基因）

——活體成像研究/體外生物發光研究/轉錄水平研究

搜索關鍵詞：

Luc reporter gene 報告基因；Luciferase 螢火蟲熒光素酶；In vivo imaging 活體成像研究；熒光素酶/ATP水平研究；報告基因質粒；報告基因bing毒顆粒；螢火蟲熒光素；甲蟲熒光素；CAS：103404-75-7；

基本描述：

D-熒光素（D-Luciferin）是熒光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍用于整個生物技術領域，特別是體內活體成像技術。作用機制是在ATP和熒光素酶的作用下，D-熒光素（底物）被氧化發光。當熒光素過量時，產生的光量子數與熒光素酶的濃度呈正相關性（見下圖）。將攜帶熒光素酶編碼基因（Luc）的質粒轉染進入細胞后，導入研究動物如大小鼠體內，之后注入熒光素，通過生物發光成像技術（BLI）來檢測光強度變化，從而實時監測疾病發展狀態或藥物的治療功效等。也可以利用ATP對此反應體系的影響，根據生物發光強度的變化 來指示能量或生命體征。

基本應用：

1. 體內活體成像In vivo imaging；

2. 體外研究，包括熒光素酶和ATP水平分析；報告基因分析；高通量測序和各種污染檢測。

常見商業化類型的差異（熒光素鉀，鈉，游離酸）：

目前市場上常見的有三種產品形式，D-熒光素（游離酸），D-熒光素（鈉鹽），和D-熒光素（鉀鹽）。這三種產品主要差別在于溶解特性。

1）D-熒光素（游離酸）在水以及緩沖體系內的溶解性都很弱，除非溶于弱堿如NaOH和KOH溶液。溶于甲醇（10 mg/ml）和DMSO（50 mg/ml）。

2）D-熒光素（鈉鹽）和D-熒光素（鉀鹽）能夠非常容易且快速的溶入水或者緩沖液中，使用方便，溶劑無毒性，特別適合體內實驗。配成溶液后的三種產品，在絕大多數應用上都沒有實質性的差別。

3）D-熒光素（鈉鹽）和D-熒光素（鉀鹽）基本上沒有差別，主要是使用習慣等因素影響。整體來看，鉀鹽的應用文獻明顯多于鈉鹽。

使用方法【體內成像/腹腔注射】

由于D-熒光素進入體內的生物分布非常快速且動力學具組織依賴性，因此，研究人員需正式實驗前確定自身動物在D-熒光素注射后的成像采集zuijia時間。通過建立動物模型的熒光素酶動力學曲線來完成。

一．動力學曲線建立（Kinetic curve）

1.1 如下腹腔注射（i.p.）D-熒光素。傾向于注射清醒小鼠，如果需要在注射前麻醉小鼠，也是可以的，但可能會稍微延長動力學（熒光素酶表達峰值時間點）。

1.2 等待三分鐘，然后按照自身選擇的方法如氣體麻醉或注射麻醉。

1.3 將麻醉動物置于成像腔內，D-luciferin注射約5min后拍*張照片。

1.4 每隔5-10min采集圖像zui高40min，建立模型相關的熒光素酶表達動力曲線。使用2%異氟烷的麻醉健康動物能在活體成像系統如IVIS內安全放置45min。

1.5 一旦建立曲線后能確定zuijia的信號采集點。大部分的模型都是在D-熒光素注射10-20min后采集圖像。

二．D-熒光素溶液準備

2.1 用無菌的PBS（w/o Mg²⁺）或者DPBS（w/o Mg²⁺）配制D-熒光素（鈉鹽/鉀鹽）儲存液（15mg/ml，根據動物體重和單次注射體積來決定），0.2µm濾膜過濾除菌。混勻后立即使用或分裝于-20℃或-80℃凍存，避免反復凍融。一旦使用，放到4℃解凍，保持冰冷且避光。

2.2 注射150mg/kg體重。（比如，體重10g小鼠注射100μl 15mg/ml的儲存液從而給1.5mg D-熒光素）；

2.3 于成像前5-15min腹腔注射D-熒光素。

【注意】：對每只動物模型需要建立D-熒光素動力學曲線研究，以確定熒光素注射后達到信號峰值的時間點。

三．腹腔注射（i.p.）

應用示例【生物化學發光體內成像】

Fig. 1 Image illustrates the IVIS spectrum imager and a mouse placed inside the camera box.

Fig. 2 Bioluminescence in vivo imaging. A. Representative luciferase time course (every 2 min) imaging of mice bearing subcutaneous tumors injected with luciferin. B. Graph illustrates the bioluminescence saturation of the whole mouse (displayed in A.) obtained

產品訂購： 更大包裝或產品技術問題，請來電/在線咨詢，:, :。

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
 

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供產品。