Coelenterazine Native 天然腔腸素

產品關鍵詞：

Coelenterazine (CTZ) 天然腔腸素；海腎熒光素酶（Rluc）；分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）；螢火蟲熒光素酶（Fluc）；In vivo bioluminescence imaging 活體動物體內成像技術；CAS NO：50909-86-9；

產品信息

【溫馨提示】：見我司懋康生物（maokangbio）提供的活體成像底物-腔腸素及衍生物產品專題。

產品描述

腔腸素（Coelenterazine）是在水生生物中發(fā)現(xiàn)的一種發(fā)光基團（luminophore），是許多熒光素酶的作用底物，包括海腎熒光素酶（Renilla reniformis luciferase, Rluc），分泌型膜錨定熒光素酶（Gaussia luciferase, Gluc）和藪枝蟲熒光素酶（Obelia luciferase），和發(fā)光蛋白包括水母發(fā)光蛋白（Aequorin）的構成之一。其作用原理是以腔腸素為底物的熒光素酶，在含分子氧的條件下，氧化腔腸素產生高能量的中間產物，在此過程發(fā)射藍色光，光波長在450~480nm【見圖1】。而甲蟲（或螢火蟲）熒光素/熒光素酶（FLuc）系統(tǒng)不同，其在含分子氧的條件下，還需要ATP和Mg²⁺的存在才能同時發(fā)光，光波長在550-570nm。正由于生物發(fā)光信號和底物的差異，RLuc常常與FLuc聯(lián)合用于多重轉錄報告基因研究，或用作Fluc系統(tǒng)內螢火蟲熒光素酶轉染的內參。腔腸素應用甚是廣泛，包括：1）活細胞或組織的鈣離子檢測；2）細胞或組織的超氧化物和過氧亞硝基陰離子（活性氧，ROS）化學發(fā)光檢測；3）基因報告基因檢測；4）動物活體檢測；5）ELISA和生物發(fā)光共振能量轉移（BRET）用于蛋白相互作用研究；6）藥物高通量篩選（HTS）；

圖1. 海腎熒光素酶（Rluc）催腔腸素發(fā)光的反應流程

天然腔腸素（Coelenterazine Native，CTZ-Native）是自然界中存在豐富的一種腔腸素，也是目前應用普遍的一種標準底物。不僅是脫輔基水母發(fā)光蛋白（APO）的底物，也是海腎熒光素酶（Rluc）和分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）等熒光素酶的作用底物。前者用于檢測鈣離子濃度，后者用作熒光素酶的報告基因檢測系統(tǒng)。還可用于生物共振能量轉移BRET，細胞或組織內的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子水平（ROS）的化學發(fā)光檢測等。

產品特性

1）   CAS NO：55779-48-1

2）   化學名：8-benzyl-6-(4-hydroxyphenyl)-2-[(4-hydroxyphenyl)methyl] -7H-imidazo [1,2-a]pyrazin-3-one

3）   同義名：Coelenterazine, nativ; native Coelenterazine; Coelenterazine free base; native-CTZ; 腔腸素游離酸；

4）   分子式：C₂₆H₂₁N₃O

5）   分子量：423.46 g/mol

6）   純度：>95%

7）   外觀：黃色至棕黃色結晶性粉末

8）   溶解性：溶于甲醇或乙醇，不要溶于DMSO

9）   化學結構式：

注意事項

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

操作步驟

一、  腔腸素工作液制備

【有關腔腸素溶解的注意事項】：

1）   腔腸素溶于甲醇或乙醇，不可溶于DMSO。腔腸素的水溶性相對比較低，一般情況需先將腔腸素溶于酸化的醇類溶劑配成相對高濃度的母液，然后再用水溶性緩沖液稀釋到需要的工作濃度，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2）   腔腸素在溶液中的穩(wěn)定性比較低，號于正式實驗前才配制溶液（包括高濃度母液）。但若實際要求，必須保存母液，目前來說穩(wěn)定的溶劑是丙二醇，往內加入少量L-抗壞血酸，β-巰基乙醇，DTT，DTE，或少量HCl能維持其還原態(tài)。不過，還原劑可能會減低氧化腔腸素（氧化為Coelenteramide）的動力學速率。也有可能破壞熒光素酶活性。而凍存在醇類溶劑中可能引起腔腸素沉淀，實際取決于溶液濃度。當然，可通過加熱50-60℃，使得沉淀重新溶解。必須確保無可見沉淀，或在實驗前（特別是活體動物實驗）離心去沉淀。

1.1    腔腸素母液制備

1.2    腔腸素工作液制備

二、  操作方法

2.1 體外生物發(fā)光

2.2 體內動物成像

【注意】：腔腸素的注射劑量可能根據動物類型、品種、注射方式以及報告基因種類有所差異。加的注射劑量請自行摸索或參考文獻來做。

對于海腎熒光素酶報告基因系統(tǒng)，通過腹腔（IP）或靜脈注射（IV）按照25-100μg/只小鼠能得到良好結果。對于分泌型膜錨定熒光素酶（Gluc）報告基因系統(tǒng)，由于分泌型膜錨定熒光素酶代謝活性增加，相對來說需要更高量的腔腸素。文獻（Tannous BA. Gaussia luciferase reporter assay for monitoring of biological processes in culture and in vivo.Nat Protoc.2009;4(4):582-591.）提到，當用靜脈注射（IV）按照4mg/kg體重給藥能得到良好結果。

a）根據自身實驗室條件選擇適當方法麻醉動物，視情況決定是否去皮（通常黑色皮毛動物需去皮）。

b）根據實際情況往動物體內注射相應劑量步驟1.2 配制好的腔腸素工作液。比如，對于海參熒光素酶報告基因系統(tǒng)，使用26-gauge針頭注射器尾靜脈注射100µl 2 mM (~1mg/ml)腔腸素工作液，然后立即對動物進行體內成像檢測，以獲得峰值信號。

相關產品

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產品。

Coelenterazine Native 天然腔腸素 Coelenterazine Native 天然腔腸素